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非洲豬瘟亞單位疫苗純化工藝方案

2024. 09. 18
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非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒ASFV引起的一種高度傳染性豬病,其發(fā)病特征是高燒、食欲不振、發(fā)紺、嚴(yán)重內(nèi)出血,該病發(fā)病過(guò)程短,最急性和急性感染死亡率高達(dá)100%,世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病,該病也是我國(guó)重點(diǎn)防范的一類(lèi)動(dòng)物疫情。


ASF于1920 年首次發(fā)現(xiàn)于非洲,而在2007年以來(lái),非洲豬瘟在全球多個(gè)國(guó)家發(fā)生、擴(kuò)散、流行,特別是俄羅斯及其周邊東歐國(guó)家,并于2018年傳播到中國(guó),對(duì)生豬養(yǎng)殖造成重大打擊,最終導(dǎo)致豬肉價(jià)格在后兩年內(nèi)連續(xù)攀升。

非洲豬瘟病毒結(jié)構(gòu)特征

①大型雙鏈DNA病毒;

②正二十面,直徑約為200nm,呈同心圓狀;

③病毒基因組長(zhǎng)度在170-193kb,可編碼150-200個(gè)病毒蛋白,包括68個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白和100多個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白

非洲豬瘟亞單位疫苗純化工藝方案

圖1 非洲豬瘟病毒的結(jié)構(gòu)[1]

非洲豬瘟疫苗

非洲豬瘟病毒發(fā)現(xiàn)已有100余年,但目前沒(méi)有特效藥,導(dǎo)致非洲豬瘟病毒疫苗開(kāi)發(fā)滯后的主要因素在于非洲豬瘟病毒復(fù)雜的基因組結(jié)構(gòu)和多變的基因型。病毒基因組可編碼區(qū)域多;衣殼蛋白多且功能尚未完全明確,仍在持續(xù)研究中;免疫逃逸機(jī)制復(fù)雜,病毒致病機(jī)理仍不完全清楚。


目前疫苗研究的主要方向?yàn)闇p毒活疫苗以及重組亞單位疫苗,而減毒活疫苗在國(guó)內(nèi)的研究以中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所為代表。重組亞單位疫苗方面,普萊柯生物工程股份有限公司與中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所合作的亞單位疫苗,已向農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提交獸藥應(yīng)急評(píng)價(jià)材料[2]。
重組亞單位的研究有蛋白如:p14、p22、p30、p34、p54、p72、C129R、DP96R、A104R等。
重組亞單位疫苗工藝路線(xiàn)
以下以重組亞單位(帶His標(biāo)簽)疫苗為例,推薦使用博進(jìn)生物的聚合物層析介質(zhì)進(jìn)行純化。
非洲豬瘟亞單位疫苗純化工藝方案
圖2 重組亞單位疫苗工藝路線(xiàn)

博進(jìn)生物的聚合物層析介質(zhì),基質(zhì)為聚丙烯酸酯,采用柔性親水修飾技術(shù),形成聚合物-親水材料的核殼結(jié)構(gòu),兼具瓊脂糖良好生物相容性和聚合物的剛性結(jié)構(gòu),抗污染性良好,能耐受一定濁度的料液。在使用Ni親和層析捕獲目的蛋白后,使用陰離子層析進(jìn)一步去除雜蛋白和內(nèi)毒素,減輕疫苗注射后所產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)。

相關(guān)層析介質(zhì)產(chǎn)品介紹

以下為博進(jìn)生物的His標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì)產(chǎn)品信息,采用該產(chǎn)品可快速?gòu)募?xì)胞破碎液/培養(yǎng)液中捕獲His標(biāo)簽融合蛋白。博進(jìn)生物的His標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì)根據(jù)螯合配基的種類(lèi)分為三類(lèi):亞氨基二乙酸(IDA)、次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺三乙酸(TED)。

非洲豬瘟亞單位疫苗純化工藝方案

以下為博進(jìn)生物的HPQ強(qiáng)陰離子的產(chǎn)品信息,HP系列產(chǎn)品的孔徑為30nm,適合用于200kDa以下分子量的目的蛋白純化。

非洲豬瘟亞單位疫苗純化工藝方案

相關(guān)產(chǎn)品訂購(gòu)信息如下:

非洲豬瘟亞單位疫苗純化工藝方案

參考來(lái)源:

[1] Wang N , Zhao D , Wang J ,et al.Architecture of African swine fever virus and implications for viral assembly[J].American Association for the Advancement of Science, 2019(6465).DOI:10.1126/SCIENCE.AAZ1439.

[2] 藥時(shí)空.《非洲豬瘟疫苗的研發(fā)進(jìn)展》.2024-07-19



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